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2015-07-07透析袋使用說明及介紹

透析技術自Thomas Graham 于1861年發明到現在已有一百多年的歷史,它已成為生物化學實驗室最簡便,最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,去除鹽、少量有機溶劑、小分子雜質、樣品濃縮和改變微量樣品的緩沖系統等都要用到透析技術。
    生物樣品的透析只需使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子等物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內、外兩邊的濃度達到平衡。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的溶質濃度梯度形成的。透析的速度同欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度、膜的面積和溫度成正比,與膜的厚度成反比。升高溫度可加快透析速度。為最大限度地保持生物大分子的活性,通常采用4℃透析。
    透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜。目前較常用的是美國Union Carbide (聯合碳化物公司)和美國光譜醫學公司生產的各種尺寸的透析管,其截留分子量MwCO(即留在透析袋內的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)通常從700到數萬不等。
    商品化的透析袋可制成管狀,其扁平寬度為6~50 mm不等。為防干裂,出廠前一般都經10%的甘油處理,透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其它生物活性物質有害,用前必須除去。新購進的透析袋必須經過處理才能使用。50%的乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,再用蒸餾水沖洗后即可使用。實驗證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于蒸餾水中,置4℃保存。若長時間不用,可加入適量的疊氮鈉(NaN2),以抑制微生物的生長。干的透析袋彎折時易出現裂口,用時必須仔細檢查。
    經過處理的透析袋,使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿蒸餾水,用手指稍加壓,檢查是否漏液,確證無誤后,再用蒸餾水洗凈,方可裝入待透析樣品。裝入樣品時通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,因透析樣品中的小分子濃度較大,袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過夜時,體積增加是正常的,有時甚至可達50%以上。透析可以使用燒杯、量筒和塑料桶等容器,容器的大小以20-50:1為宜。少量樣品溶液的透析,可在袋內放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
    通常為了把握透析效果,有時需要對透析液中欲去除的小分子殘留物進行分析,如甘氨酸、二甲基甲酰胺、甲醛、戊二醛、碳酸根、偶聯劑等。小分子殘留物的檢測分析方法很多,如 (NH4)2SO4可用1%的BaCl2檢查,NaCl、KCl等可用1%的AgNO3 檢查。有些檢測方法比較復雜,或需要一定的條件,如確有必要可參考相關文獻資料。
    為了加快透析速度,提高透析效率,除及時更換透析液外,還可使用磁力攪拌,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設計與制作各種簡易的透析裝置。美國生物醫學公司(Biomed Instruments Inc.)生產的各種型號的Zeineh 透析器,由于使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
 
附:透析袋的處理
 1. 根據需要,把透析管剪截成適當長度(10—20cm)。
 2. 在大體積的2%(w/v)碳酸氫納和1mmol/L EDTA(pH8.0)中將透析管煮沸10分鐘。
 3. 用蒸餾水徹底清洗。
 4. 于EDTA(1mmol/L,pH8.0)中煮沸10分鐘,
 5. 或將透析管置盛有蒸餾水的燒杯內,高壓蒸汽滅菌10分鐘。
 6. 冷卻后,存放于4℃。透析管必須確保始終浸于溶液中。
 7. 從此時起取用透析管時總須戴手套。
 8. 用前將透析管用蒸餾水清洗干凈后即可使用。

一、    膜技術參數: 
①PH穩定范圍 : 5-9
②污染物水平: 硫化物<0.3%; 重金屬<50ppm
③化學兼容性: 與很多鹽兼容,比如CaCl2, (NH4)2SO4;還可與分子生物學及酶學中常用的水溶劑、有機溶劑兼容,比如異丙醇、乙醇和丙酮。
④溫度抵抗性:可煮沸,可高壓滅菌。
⑤蛋白吸附:每克透析袋吸附蛋白量小于1ng 。
二、    儲存條件: 
未處理前的透析袋可存放于0-43度,密封包裝好以防干裂;處理好暫時不用的透析袋需要放置到透析袋儲存液中,并放于4-37度。
三、    透析袋使用方法:
①把透析袋剪成適當長度(10cm左右)的小段。
②取適量透析袋處理液(Fast-Tre Solution)稀釋100倍,將透析袋放于其中煮沸10分鐘。
③取出用蒸餾水徹底清洗透析袋。
④ 暫不使用的話需要將透析袋完全浸泡到稀釋100倍后的透析袋儲存液(Long-Sav Solution)中,存放于4度。從此時起取用透析袋是必須戴手套。
⑤浸泡在透析袋儲存液中的透析袋取出使用前,須將透析袋內裝滿水然后排出,將之清洗干凈,沖洗三次即可。
實驗要求不高的可以用簡易處理方法:在沸水中煮10min即可使用
⑥使用時,一端用下沉透析袋夾子夾緊,灌滿水后,用手指適當加壓,檢查不漏,方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內放一玻璃珠,以使透析袋處于懸浮狀態,即可進行透析(詳見下頁透析袋裝置簡圖)。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。


一、透析的定義:
       透析(dialysis)是指物質穿過膜的選擇性擴散過程。可用于分離分子量大小不同的溶質,低于膜所截留閾值分子量的物質可擴散穿過膜,高于膜截留閾值分子量的物質則被保留在半透膜的另一側。
 
二、透析袋:
       透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,就叫做透析袋。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。比如蛋白質和DNA的脫鹽濃縮,納米材料的篩選,中藥成分萃取后有機溶劑的去處等。
 
三、透析方法
    透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。通過多次更換透析液而去除鹽和小分子物質
 
四、我們的產品
    我們所提供的普通透析袋及CE膜和RC膜透析袋已經被廣泛的應用于蛋白質、核酸脫鹽濃縮實驗,納米材料的篩選,萃取后中藥成分中有機溶劑的去除,污水處理,抗體制備等實驗。

透析即用半透膜(透析袋)將大分子蛋白質分離出來。
在生物大分子制備過程中除去鹽、少量有機溶劑、生物小分子雜質和濃縮樣品,透析法最簡便。
 
技術指標:MWCO(截留分子量),單位:Diatoms 。
透析時,小于MWCO的分子在透析膜二邊溶液濃度差產生的擴散壓作用下滲過透析膜,
其速度與濃度梯度、膜面積及溫度成正比。
欲快速透析可采用直徑較小的透析袋以增加膜面積。
常用溫度:4℃,升溫、更換袋外透析液或用磁力攪拌器,均能提高透析速度。
 
使用須知:
① 某些化學物質會破壞透析袋微孔且不可逆轉。計有:
    烴、鹵化烴、醇、酮、酯、胺、丙酮、甲基乙基酮、二氧雜環乙烷、環已烷等。
    酸(甲酸、乙酸、稀強酸如5%HCI),10%苯酚,30%雙氧水。
    甲醇、乙醇:濃度小于5%時,透析功能在,而MWCO變化。
 
② 蛋白質吸附量,小于1ug/克,(以透析袋干重計)。 正常使用PH值5-9(可重復使用)。極限使用PH值2-12(一次性使用)。
 
③ 前處理:煮沸5分鐘后用蒸餾水60℃洗沖2分鐘,置4℃蒸餾水中待用。
    長期保存液:0。05%-0。1%疊氮鈉,1mMEDTA或50%甘油,溫度(4℃),使用前以蒸餾水洗凈。
 
④ 即用型透析袋毋須前處理,使用前用蒸餾水洗凈即可。
   
⑤ 透析袋裝液時應留1/3-1/2空間,以防透析過程中,袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破
  (含鹽量高的蛋白質溶液透析過夜時,體積增加50%系正常情況)。
 
⑥ 使用時須戴手套。
 
⑦ 透析效果檢查用 1%氯化鋇 檢查硫酸銨、硫酸鈉1%硝酸銀 檢查氯化鈉、氯化鉀。

 

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